Флуоресцентті резонансты энергияны тасымалдау (FRET)
Флуоресценциялық резонансты энергияны тасымалдау (FRET) – молекула аралық электрлік жұптардың әрекеттесуі арқылы донордың қоздырылған күйінің энергиясы акцепторлық қоздырылған күйге ауысатын радиациялық емес энергия алмасу процесі.Бұл процесс фотондарды қамтымайды, сондықтан радиациялық емес.Бұл талдаудың артықшылығы жылдам, сезімтал және қарапайым.
FRET талдауында қолданылатын бояу бірдей болуы мүмкін.Бірақ көптеген қолданбаларда әртүрлі бояғыштар шын мәнінде қолданылады.Қысқаша айтқанда, жарық резонанстық энергияның берілуі донорлық топ қозған кезде донордан (1-бояғыш) акцепторға (бояғыш 2) жұп дипольді беру болып табылады.Жалпы алғанда, Донорлық флюорофор тобының сәулелену спектрі Акцептор тобының сіңіру спектрімен қабаттасады.«Екі флюорофор арасындағы қашықтық сәйкес болған кезде (10 - 100 А), флюорофор энергиясының донордан акцепторға ауысуын байқауға болады».Энергияның берілу әдісі рецептордың химиялық құрылымына байланысты:
1. Молекулярлық дірілге айналады, яғни энергияны тасымалдаудың жарық сәулесі жоғалады.(рецептор жарық сөндіргіш болып табылады)
2. Шығарылу рецептордың өзіне қарағанда қарқындырақ, нәтижесінде екінші флуоресценция спектрінде қызыл ығысу пайда болады».(Рецепторлар – жарық шығарғыштар).
Донорлық топ (EDANS) және акцепторлық ген (DABCYL) АИВ протеазасының табиғи субстратымен біркелкі байланысқан және субстрат ажыратылмаса, DABCYL EDANS-ты сөндіреді, содан кейін фторға дейін анықталмайды.HIV-1 протеазасы ажыратылғаннан кейін EDANS DABCYL арқылы сөндірілмейді, ал EDANS люциферазалары кейіннен анықталуы мүмкін.Протеаза тежегіштерінің қолжетімділігін EDANS флуоресценция қарқындылығының өзгеруі арқылы бақылауға болады.
FRET пептидтері пептидазаның бейспецификалығын зерттеуге ыңғайлы құрал болып табылады.Оның реакция процесін үздіксіз бақылауға болатындықтан, ол фермент белсенділігін анықтаудың ыңғайлы әдісін қамтамасыз етеді.Донор/акцептор арқылы пептидтік байланыстардың гидролизінен кейін пайда болған жылтыр наномольдік концентрациялардағы фермент белсенділігінің өлшемін қамтамасыз етеді.FRET пептиді бүтін болған кезде, ол ішкі жарқылдың кенет жоғалуын көрсетеді, бірақ донор/акцепторға қарама-қарсы кез келген пептидтік байланыс үзілгенде, ол жарқыл шығарады, оны үздіксіз анықтауға болады және содан кейін фермент белсенділігін сандық түрде анықтауға болады.
Жіберу уақыты: 14 тамыз 2023 ж