Рекомбинантты ақуыз антигендерінде жиі бірнеше әртүрлі эпитоптар болады, олардың кейбіреулері ретті эпитоптар, ал кейбіреулері құрылымдық эпитоптар.Жануарларды денатуратталған антигендермен иммундау арқылы алынған поликлондық антиденелер жеке эпитоптарға тән антиденелердің қоспалары болып табылады және жалпы табиғи құрылымдарды немесе денатуратталған мақсатты ақуыздарды анықтау үшін пайдаланылуы мүмкін.Денатуратталған белоктарды иммуноген ретінде пайдаланудың жанама артықшылығы - денатуратталған ақуыздардың иммуногенділігі жоғары және жануарларда күшті иммундық жауапты ынталандыруы мүмкін.
Ішек таяқшасының экспрессиялық жүйесі әдетте антигендік мақсатта таңдалады, себебі ол уақыт пен ақша тұрғысынан ең қымбат жүйе болып табылады.Мақсатты ақуызды экспрессиялау мүмкіндігін және тазарту ыңғайлылығын жақсарту үшін кейде мақсатты ақуыздың белгілі бір домен сияқты шағын фрагменті ғана экспрессияланады.
Белоктардың үш өлшемді құрылымы
Ақуыздың арнайы домені
Егер антиденелерді дайындаудың мақсаты тек қана WB анықтау үшін болса, антиген ретінде синтетикалық ұсақ пептидті пайдалану үнемді және жылдам, бірақ пептидтік сегментті дұрыс таңдамау салдарынан әлсіз иммуногендік немесе регенділік қаупі бар.Антиденелерді дайындау ұзақ уақытты қажет ететіндіктен, эксперименттің сәттілігін қамтамасыз ету үшін полипептидті антигенді пайдаланып антиденелерді дайындау үшін екі немесе үш түрлі пептидтік сегменттер жиі таңдалады.
Иммунизациялау үшін полипептидті антигеннің тазалығы 80%-дан жоғары болуы керек.Жоғарырақ тазалық теориялық тұрғыдан жақсырақ спецификалық антиденелерді алуға болатынымен, іс жүзінде жануарлар әрқашан спецификалық емес антиденелердің көп мөлшерін шығарады, осылайша антиген тазалығының артықшылықтарын жасырады.
Сонымен қатар, шағын пептидтерден антиденелерді дайындау оның иммуногенділігін арттыру үшін сәйкес тасымалдаушы антигенмен айқаспалы болуы керек.Екі жалпы антигендік тасымалдаушылар - KLH және BSA.
Хабарлама уақыты: 23 наурыз 2023 ж