HPLC ақаулары мен шешімдеріне ең бейім

Жоғары дәлдікті құрал ретінде HPLC пайдалану кезінде дұрыс пайдаланылмаса, кейбір қиыншылықтар тудыратын шағын мәселелерге әкелуі мүмкін.Ең жиі кездесетін мәселелердің бірі - бағандарды қысу мәселесі.Ақаулы хроматографты қалай тез жоюға болады.HPLC жүйесі негізінен резервуарлы бөтелкеден, сорғыдан, инжектордан, колоннадан, бағанның температуралық камерасынан, детектордан және деректерді өңдеу жүйесінен тұрады.Бүкіл жүйе үшін тіректер, сорғылар және детекторлар негізгі құрамдас бөліктер және ақауларға бейім негізгі орындар болып табылады.

Баған қысымының кілті HPLC пайдалану кезінде мұқият назар аударуды қажет ететін аймақ болып табылады.Колонна қысымының тұрақтылығы хроматографиялық шыңның пішініне, колоннаның тиімділігіне, бөлу тиімділігіне және ұстау уақытына тығыз байланысты.Баған қысымының тұрақтылығы қысым мәнінің тұрақты мәнде тұрақты екенін білдірмейді, керісінше қысымның ауытқу диапазоны 345кПа немесе 50PSI арасында (баған қысымы тұрақты және баяу өзгеретін кезде градиенттік элюцияны қолдануға мүмкіндік береді).Тым жоғары немесе тым төмен қысым - бағандағы қысым мәселесі.

HPLC ақаулары мен шешімдеріне ең бейім

1, жоғары қысым - HPLC пайдаланудағы ең көп таралған мәселе.Бұл қысымның кенеттен көтерілуін білдіреді.Жалпы алғанда, келесі себептер бар: (1) Жалпы, бұл ағын арнасының бітелуіне байланысты.Осы тұста біз оны бөлшектеп қарастыруымыз керек.а.Алдымен вакуумдық сорғының кірісін кесіңіз.Осы кезде PEEK түтігі сұйықтықпен толтырылды, осылайша PEEK түтігі еріткіш бөтелкесінен сұйықтықтың өз қалауымен тамып жатқанын көру үшін кішірек болды.Егер сұйықтық тамшыламаса немесе баяу тамшыласа, еріткіш сүзгісінің басы бітеліп қалады.Емдеу: 30% азот қышқылына жарты сағат салып, өте таза сумен шайыңыз.Егер сұйықтық кездейсоқ тамшыласа, еріткіш сүзгісінің басы қалыпты және тексеріліп жатыр;б.Жылжымалы фаза колоннадан өтпеуі үшін Тазарту клапанын ашыңыз, ал қысым айтарлықтай төмендемесе, сүзгі ақ басы бітеліп қалады.Емдеу: Сүзілген ақ нүктелер жойылып, жарты сағат бойы 10% изопропанолмен ультрадыбыспен өңделеді.Қысым 100PSI-ден төмен түссе, сүзгіленген ақ басы қалыпты және тексеріліп жатыр;в.Колоннаның шығатын ұшын алып тастаңыз, егер қысым төмендемесе, баған бітеліп қалады.Емдеу: егер бұл буферлік тұздың бітелуі болса, қысым қалыпты болғанша 95% шайыңыз.Егер кедергі біршама жоғары сақталған материалдан туындаса, қалыпты қысымға қарай асығу үшін қазіргі жылжымалы фазадан күшті ағынды пайдалану керек.Жоғарыда көрсетілген әдіс бойынша ұзақ уақыт тазалау қысымы төмендемесе, колоннаның кірісі мен шығысы керісінше аспапқа қосылған деп санауға болады, ал бағананы жылжымалы фазамен тазалауға болады.Осы уақытта, егер колонна қысымы әлі де азаймаса, колоннаның кіреберіс елеуіш пластинасын тек ауыстыруға болады, бірақ операция жақсы болмағаннан кейін, баған әсерінің төмендеуіне әкелуі оңай, сондықтан азырақ қолдануға тырысыңыз.Күрделі мәселелер үшін бағанды ​​ауыстыру қарастырылуы мүмкін.

(2) Ағын жылдамдығының дұрыс емес параметрі: дұрыс ағын жылдамдығын қалпына келтіруге болады.

(3) Ағынның дұрыс емес коэффициенті: ағындардың әртүрлі пропорцияларының тұтқырлық индексі әртүрлі және тұтқырлығы жоғары ағынның сәйкес жүйелік қысымы да үлкенірек.Мүмкін болса, тұтқырлығы төмен еріткіштерді ауыстыруға немесе қайта орнатуға және дайындауға болады.

(4) Жүйедегі қысымның нөлдік дрейфі: сұйықтық деңгейі сенсорының нөлін реттеңіз.

2, қысым тым төмен (1) әдетте жүйенің ағып кетуінен туындайды.Не істеу керек: Әрбір қосылымды, әсіресе бағанның екі шетіндегі интерфейсті тауып, ағып кету аймағын қатайтыңыз.Бағананы алыңыз және PTFE пленкасын тиісті күшпен тартыңыз немесе сызыңыз.

(2) Газ сорғыға түседі, бірақ қысым әдетте осы уақытта тұрақсыз, жоғары және төмен.Ең бастысы, сорғы сұйықтықты сіңіре алмайды.Емдеу әдісі: тазалау клапанын ашыңыз және 3~5 мл/мин ағын жылдамдығымен тазалаңыз.Әйтпесе, ауа көпіршіктері арнайы ине түтігі арқылы шығару клапанында сорылды.

(3) Жылжымалы фазаның шығуы жоқ: резервуар бөтелкесінде жылжымалы фазаның бар-жоғын, раковинаның жылжымалы фазаға батырылғанын және сорғының жұмыс істеп тұрғанын тексеріңіз.

(4) Анықтамалық клапан жабылмаған: анықтамалық клапан баяулаудан кейін жабылады.Ол әдетте 0,1-ге дейін төмендейді.Анықтамалық клапанды жапқаннан кейін ~ 0,2 мл/мин.

Түйіндеме:

Бұл жұмыста сұйық хроматографиядағы жалпы мәселелер ғана талданады.Әрине, практикалық қолдануда біз басқа да мәселелерге тап боламыз.Қателерді өңдеу кезінде біз келесі принциптерді ұстануымыз керек: гипотетикалық фактор мен мәселе арасындағы байланысты анықтау үшін бір уақытта тек бір факторды өзгерту;Жалпы, ақауларды жою үшін бөлшектерді ауыстырған кезде, қалдықтарды болдырмау үшін бөлшектелген бұзылмаған бөлшектерді орнына қоюға назар аудару керек;Жақсы жазба әдетін қалыптастыру ақауларды жоюдың сәттілігінің кілті болып табылады.Қорытындылай келе, HPLC пайдалану кезінде үлгіні алдын ала өңдеуге және жабдықтың дұрыс жұмыс істеуіне және техникалық қызмет көрсетуіне назар аудару маңызды.